Des scientifiques explorent comment isoler un virus serpique de chauve-souris au Japon

Dans une étude récente publiée dans Maladies infectieuses émergentesLes chercheurs ont mené des expériences pour isoler le virus serpique de la chauve-souris à l’aide de Rhinolophus cornutus Les chauves-souris de plusieurs régions du Japon sont tombées dans le même groupe de virus associés au coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SARS-CoV-2).

Les bêta-coronavirus humains hautement pathogènes (β-CoV) tels que le coronavirus du syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS-CoV), le SRAS-CoV-2 et le syndrome respiratoire du Moyen-Orient (MERS-CoV) ont été considérés comme provenant de chauves-souris. Par conséquent, la surveillance du β-CoV est essentielle pour améliorer la compréhension et évaluer le potentiel de propagation du β-CoV chez l’homme. Il a été signalé que les Sarpicvirus identifiés dans des pays asiatiques comme la Chine sont génétiquement divers. Cependant, les différences génétiques et la distribution des virus de chauve-souris au Japon ne sont pas bien décrites et nécessitent une enquête plus approfondie.

Les auteurs de la présente étude ont précédemment montré qu’un pseudotype viral basé sur le VSV (virus de la stomatite vésiculeuse) comprend la protéine S (pointe) du sarbecovirus Rc-o319 de R. atome Seules les cellules exprimant le Rc-ACE2 (enzyme de conversion de l’angiotensine 2) infectées, mais pas les cellules exprimant l’ACE2 humain (hACE2) ou autre rhinolovos Cellules exprimant ACE2.

sur les études

Dans cette étude, les chercheurs rapportent l’identification, l’isolement et la caractérisation biologique et génétique des virus sarcoïdes provenant de chauves-souris dans différents endroits japonais.

Des échantillons de selles ont été obtenus à partir de R. ferrumequinum f R. atome pagayer Espèce des préfectures de Chiba, Shizuoka et Niigata. Une RT-PCR en temps réel (réaction en chaîne par polymérase de transcription inverse) a été réalisée et l’équipe a généré des cellules Vero exprimant RcACE2 (Vero-RcACE2) sur la base de la protéine Vero/transmembrane. sIRIN2 (TMPRSS2).

Une analyse de séquençage de nouvelle génération (NGS) a été effectuée pour déterminer les séquences du génome entier de tous les isolats viraux, et les séquences ont été déposées dans GenBank. De plus, une analyse de parcelle de similarité de la séquence entière du génome a été réalisée en utilisant chaque isolat comme requête. Un arbre phylogénétique des virus sarcoïdes de chauve-souris au Japon a été construit sur la base du séquençage du génome entier avec analyse de probabilité maximale et répétitions.

Le S RBM (Receptor Binding Model) des isolats de chauves-souris du Japon était aligné sur ceux des autres virus Sarpic. Pour évaluer la cinétique de croissance des isolats de virus Sarbic de chauves-souris au Japon, R. atome Les isolats de chauve-souris Rc-os20, Rc-o319, Rc-mk2 et Rc-kw8 ou SARS-CoV-2 (souche B.1.1.7) ont été inoculés dans Vero-RcACE2 [RcACE2, Vero/TMPRSS2 (WT)]Les cellules Vero-hACE2 (hACE2) ou Vero-ACE2KO (ACE2KO) et le titre viral ont été déterminés à l’aide d’essais sur plaque.

conséquences

Les isolats ont montré une croissance efficace dans les cellules d’expression rhinolovos Maïs ACE2 mais ne s’est pas bien développé dans les cellules exprimant hACE2, ce qui indique que les isolats de chauve-souris avaient une gamme étroite d’hôtes. L’analyse RT-PCR a permis la détection réussie de la séquence du gène d’enveloppe (E) des virus sarcoïdes dans un ou deux Rhinolophus cornutus échantillons dans chaque province. Les virus de chauve-souris ont été isolés avec succès grâce à l’utilisation de cultures cellulaires Vero-RcACE2, avec des effets cytopathiques massifs et une formation syncytiale à partir d’échantillons positifs à la RT-PCR de fèces de chauve-souris de chaque province.

Les isolats de chauves-souris des préfectures de Shizuoka, Niigata et Chiba ont été modélisés comme Rc-kw8, Rc-os20 et Rc-mk2, respectivement. De plus, Rc-o319 a été isolé en utilisant des cultures de cellules Vero-RcACE2. Au contraire, tout Spécimens de Rhinolophus ferremuquinum Il était chauve-souris négatif, ce qui indique la propagation des virus de chauve-souris parmi Rhinolophus cornutus Chauves-souris au Japon. Les séquences de toutes les souches de chauves-souris isolées du Japon étaient très homogènes (intervalle de 95 % à 97 %). Cependant, Rc-os20 et Rc-mk2 n’avaient pas le codage de région pour ORF8 (Open Reading Frame 8).

L’équipe a noté des similitudes significatives entre les isolats de chauve-souris tout au long de la séquence du génome, à l’exception des sites codants du domaine de liaison au récepteur S (RBD) du gène et de son domaine N-terminal (NTD). Cependant, les MTN Rc-kw8 et Rc-o319 se sont révélées être conservées. Aucune recombinaison significative n’a été observée parmi les isolats de chauves-souris. Dans l’analyse phylogénétique, des isolats ont été observés dans un seul groupe génétique appartenant à un clade génétique comprenant des virus Sarbic liés au SRAS-CoV-2.

Les résultats de l’analyse phylogénétique S RBD ont indiqué que les isolats du Japon ont été placés dans la branche génomique des organismes viraux en utilisant des orthologues ACE2 comme récepteurs. Par conséquent, l’équipe a émis l’hypothèse que les nouvelles souches isolées du Japon utilisent RcACE2 comme récepteur. les chauves-souris ont séquestré efficacement uniquement les cellules Vero-RcACE2 mais pas les cellules Vero-ACE2KO, Vero/TMPRSS2 ou Vero-hACE2. Les résultats ont indiqué que les isolats de chauve-souris s’appuyaient sur RcACE2 pour l’infection.

En revanche, le SRAS-CoV-2 a montré une réplication efficace dans les cellules Vero-RcACE2, Vero-hACE2 et Vero/TMPRSS2 mais ne s’est pas bien répliqué dans les cultures de cellules Vero-ACE2KO, suggérant que l’infection dépend de la présence de plusieurs récepteurs ACE2. , y compris de Rhinolophus cornutus chauve souris. Les résultats ont indiqué que les isolats de chauves-souris au Japon n’utilisent que bRcACE2 comme récepteur.

La majorité des séquences génomiques entre les sous-espèces du Japon étaient hautement conservées, et il se peut que depuis lors rhinolovos spp. Les espèces de chauves-souris migrent sur des distances relativement courtes et n’ont pas de contact croisé avec d’autres groupes de chauves-souris. Les exceptions étaient les régions S codant pour le RBD et le NTD, qui présentaient une grande variation génétique due aux pressions immunologiques, suggérant que les chauves-souris ont divergé de la lignée ancestrale plus récemment.

En général, les résultats de l’étude ont montré que les isolats de chauves-souris utilisaient batACE2 sous la forme d’un récepteur sans répétitions dans les cellules exprimant hACE2, et par conséquent, il s’agit d’une espèce distincte et indique la rareté de la possibilité d’infection humaine. Les Sarbecovirus peuvent muter et conduire à une infection humaine par le biais d’espèces hôtes intermédiaires dans le bétail ou la faune. Par conséquent, des études sur l’épidémiologie du virus sarcoïde chez les animaux sauvages, y compris les chauves-souris, doivent être menées avec des évaluations des risques à long terme de la possibilité de transmission zoonotique.